你是否会碰到这样的问题：在提取WB样本的时候，加入裂解液后，离心发现管内有非常多的胶状物质，非常粘稠，即使多加裂解液也是无用，还会使得蛋白浓度降低。

蛋白样本若出现粘稠的情况，会对后续的检测造成一定的影响，导致检测结果不可靠

01蛋白样本粘稠会造成什么情况?

样品洗液困难：堵塞移液器：离心后，由于样品粘稠，胶状物会堵塞移液器头，导致移液后上清液所剩无几；无法分离上清液：样品太过粘稠，移液时容易整体带出，无法有效分离上清液。

无法测定及定量：样品粘稠无法成为均一液体，导致蛋白定量（如使用BCA法）时OD值异常，无法进行准确的定量测定。

上样困难：尽管加了loading buffer进行煮样，上样样品仍然特别粘稠，很难加入到胶孔中

电泳结果不佳：SDS-PAGE时，粘稠的样品会卡在点样孔里，导致条带不成直线，有严重拖尾，条带不集中

蛋白丢失：粘稠物包裹蛋白导致无法释放，样品很难跑出理想的结果，有时甚至是完全没有条带。

02那么是什么造成蛋白质样本如此粘稠的呢？

核酸残团：在细胞裂解过程中，细胞中的DNA缠绕其他大分子物质，形成粘稠的“核酸残团”。这些核酸残团与蛋白质聚集在一起，使得样本变得粘稠。核酸残团的存在会降低蛋白提取效率，使得蛋白质丢失。

细胞碎片和油脂：裂解后的样本中可能含有细胞碎片，如油脂、难溶蛋白等。这些成分也会增加样本的粘稠度。

03如何有效降低蛋白样本的粘稠？

使用柱式法提取蛋白：柱式法蛋白提取通过优化的裂解液配方和离心管柱技术，可以有效提高裂解效率，阻截核酸，减少样本粘稠度。

超声破碎：利用超声波的能量破坏蛋白复合物，切割染色质，改善样本粘稠状态。但是超声处理可能产生泡沫，影响蛋白浓度测定及后续实验。超声产生的热量可能导致蛋白质变性或降解，因此应避免用于磷酸化等敏感蛋白的研究。

使用核酸酶降解核酸：核酸酶可以降解样本中的核酸，减少核酸残团的形成，从而降低样本粘稠度。

延长煮沸时间：在加入上样缓冲液后，适当延长煮沸时间，可以使结合在基因组DNA上的蛋白充分释放，同时导致基因组DNA的部分断裂，降低样本粘稠度。

反复抽吸：使用注射器反复抽吸样本，可以打断基因组DNA，改善样本粘稠状态。

文章出自 科研实验外包   想了解更多请关注：http://www.dj-cro.com/